Dankie dat jy Nature.com besoek het. Die blaaierweergawe wat jy gebruik het beperkte CSS-ondersteuning. Vir die beste resultate, beveel ons aan om 'n nuwer blaaier te gebruik (of om versoenbaarheidsmodus in Internet Explorer te deaktiveer). In die tussentyd, om volgehoue ondersteuning te verseker, sal ons die webwerf sonder style en JavaScript vertoon.
Die vestiging van dieremodelle van modiese verandering (MC) is 'n belangrike basis vir die bestudering van MC. Vier-en-vyftig Nieu-Seelandse Wit hase is verdeel in skynoperasiegroep, spierinplantingsgroep (ME-groep) en nukleus pulposus-inplantingsgroep (NPE-groep). In die NPE-groep is die intervertebrale skyf blootgestel deur anterolaterale lumbale chirurgiese benadering en 'n naald is gebruik om die L5 vertebrale liggaam naby die eindplaat deur te steek. NP is met 'n spuit uit die L1/2 intervertebrale skyf onttrek en daarin ingespuit. Boor 'n gat in die subchondrale been. Die chirurgiese prosedures en boormetodes in die spierinplantingsgroep en die skynoperasiegroep was dieselfde as dié in die NP-inplantingsgroep. In die ME-groep is 'n stukkie spier in die gat geplaas, terwyl in die skynoperasie-groep niks in die gat geplaas is nie. Ná die operasie is MRI-skandering en molekulêre biologiese toetsing uitgevoer. Die sein in die NPE-groep het verander, maar daar was geen duidelike seinverandering in die skynoperasiegroep en die ME-groep nie. Histologiese waarneming het getoon dat abnormale weefselproliferasie by die inplantingsplek waargeneem is, en die uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ is verhoog in die NPE-groep. Inplanting van NP in die subchondrale been kan 'n diermodel van MC vorm.
Modiese veranderinge (MC) is letsels van die vertebrale eindplate en aangrensende beenmurg wat sigbaar is op magnetiese resonansbeelding (MRI). Hulle is redelik algemeen by individue met gepaardgaande simptome1. Baie studies het die belangrikheid van MC beklemtoon weens die verband daarvan met lae rugpyn (LBP)2,3. de Roos et al.4 en Modic et al.5 het onafhanklik eers drie verskillende tipes subchondrale seinabnormaliteite in die vertebrale beenmurg beskryf. Modiese tipe I veranderinge is hipo-intense op T1-geweegde (T1W) reekse en hiperintense op T2-geweegde (T2W) reekse. Hierdie letsel openbaar fissuur-eindplate en aangrensende vaskulêre granulasieweefsel in die beenmurg. Modic tipe II veranderinge toon hoë sein op beide T1W en T2W rye. In hierdie tipe letsel kan eindplaatvernietiging gevind word, asook histologiese vetterige vervanging van die aangrensende beenmurg. Modic tipe III veranderinge toon lae sein in T1W en T2W rye. Sklerotiese letsels wat ooreenstem met die eindplate is waargeneem6. MC word beskou as 'n patologiese siekte van die ruggraat en is nou geassosieer met baie degeneratiewe siektes van die ruggraat7,8,9.
Met inagneming van die beskikbare data, het verskeie studies gedetailleerde insigte verskaf in die etiologie en patologiese meganismes van MC. Albert et al. voorgestel dat MC deur skyfherniasie veroorsaak kan word8. Hu et al. MC toegeskryf aan ernstige skyfdegenerasie10. Kroc het die konsep van "interne skyfbreuk" voorgestel, wat sê dat herhalende skyftrauma kan lei tot mikroskeure in die eindplaat. Na gesplete vorming kan eindplaat vernietiging deur die nucleus pulposus (NP) 'n outo-immuunrespons veroorsaak, wat verder lei tot die ontwikkeling van MC11. Ma et al. het 'n soortgelyke siening gedeel en berig dat NP-geïnduseerde outo-immuniteit 'n sleutelrol speel in die patogenese van MC12.
Immuunstelsel selle, veral CD4+ T helper limfosiete, speel 'n kritieke rol in die patogenese van outo-immuniteit13. Die onlangs ontdekte Th17-subset produseer die pro-inflammatoriese sitokien IL-17, bevorder chemokienuitdrukking en stimuleer T-selle in beskadigde organe om IFN-γ14 te produseer. Th2-selle speel ook 'n unieke rol in die patogenese van immuunresponse. Uitdrukking van IL-4 as 'n verteenwoordigende Th2-sel kan lei tot ernstige immunopatologiese gevolge15.
Alhoewel baie kliniese studies op MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 uitgevoer is, is daar steeds 'n gebrek aan geskikte diere-eksperimentele modelle wat die MC-proses kan naboots wat gereeld by mense voorkom en kan gebruik om die etiologie of nuwe behandelings soos geteikende terapie te ondersoek. Tot op datum is slegs 'n paar diermodelle van MC aangemeld om die onderliggende patologiese meganismes te bestudeer.
Gebaseer op die outo-immuun teorie wat deur Albert en Ma voorgestel is, het hierdie studie 'n eenvoudige en reproduseerbare konyn MC model daargestel deur NP naby die geboor vertebrale eindplaat te outooorplant. Ander doelwitte is om die histologiese kenmerke van die diermodelle waar te neem en die spesifieke meganismes van NP in die ontwikkeling van MC te evalueer. Vir hierdie doel gebruik ons tegnieke soos molekulêre biologie, MRI en histologiese studies om die vordering van MC te bestudeer.
Twee konyne het tydens die operasie aan bloeding gevrek, en vier konyne het tydens narkose tydens MRI gevrek. Die oorblywende 48 konyne het oorleef en het geen gedrags- of neurologiese tekens na die operasie getoon nie.
MRI toon dat die seinintensiteit van die ingebedde weefsel in verskillende gate verskillend is. Die seinintensiteit van die L5 vertebrale liggaam in die NPE-groep het geleidelik verander op 12, 16 en 20 weke na invoeging (T1W-volgorde het lae sein getoon, en T2W-volgorde het gemengde sein plus lae sein getoon) (Fig. 1C), terwyl die MRI-voorkoms van die ander twee groepe ingebedde dele het gedurende dieselfde tydperk relatief stabiel gebly (Fig. 1A, B).
(A) Verteenwoordigende opeenvolgende MRI's van die konyn lumbale ruggraat op 3 tydpunte. Geen seinafwykings is gevind in die beelde van die skynoperasiegroep nie. (B) Die seinkenmerke van die vertebrale liggaam in die ME-groep is soortgelyk aan dié in die skynoperasiegroep, en geen betekenisvolle seinverandering word mettertyd by die inbeddingsplek waargeneem nie. (C) In die NPE-groep is die lae sein duidelik sigbaar in die T1W-volgorde, en die gemengde sein en lae sein is duidelik sigbaar in die T2W-volgorde. Vanaf die 12-week-periode tot die 20-week-periode neem die sporadiese hoë seine rondom die lae seine in die T2W-reeks af.
Duidelike beenhiperplasie kan by die inplantingsplek van die vertebrale liggaam in die NPE-groep gesien word, en die beenhiperplasie vind vinniger plaas vanaf 12 tot 20 weke (Fig. 2C) in vergelyking met die NPE-groep, geen betekenisvolle verandering word waargeneem in die gemodelleerde vertebrale liggame; Sham-groep en ME-groep (Fig. 2C) 2A,B).
(A) Die oppervlak van die vertebrale liggaam by die ingeplante gedeelte is baie glad, die gat genees goed, en daar is geen hiperplasie in die vertebrale liggaam nie. (B) Die vorm van die ingeplante plek in die ME-groep is soortgelyk aan dié in die skynoperasiegroep, en daar is geen duidelike verandering in die voorkoms van die ingeplante plek oor tyd nie. (C) Beenhiperplasie het by die ingeplante plek in die NPE-groep voorgekom. Die beenhiperplasie het vinnig toegeneem en selfs uitgebrei deur die intervertebrale skyf na die kontralaterale vertebrale liggaam.
Histologiese analise verskaf meer gedetailleerde inligting oor beenvorming. Figuur 3 toon die foto's van die postoperatiewe snitte wat met H&E gekleur is. In die skynoperasiegroep was die chondrosiete goed gerangskik en geen selproliferasie is opgespoor nie (Fig. 3A). Die situasie in die ME-groep was soortgelyk aan dié in die skynoperasiegroep (Fig. 3B). In die NPE-groep is egter 'n groot aantal chondrosiete en proliferasie van NP-agtige selle by die inplantingsplek waargeneem (Fig. 3C);
(A) Trabeculae kan naby die eindplaat gesien word, die chondrosiete is netjies gerangskik met eenvormige selgrootte en -vorm en geen proliferasie (40 keer). (B) Die toestand van die inplantingsplek in die ME-groep is soortgelyk aan dié van die skyngroep. Trabekulae en chondrocytes kan gesien word, maar daar is geen duidelike proliferasie by die inplantingsplek nie (40 keer). (B) Daar kan gesien word dat chondrosiete en NP-agtige selle aansienlik prolifereer, en die vorm en grootte van chondrosiete is ongelyk (40 keer).
Die uitdrukking van interleukien 4 (IL-4) mRNA, interleukien 17 (IL-17) mRNA, en interferon y (IFN-γ) mRNA is waargeneem in beide die NPE en ME groepe. Wanneer die uitdrukkingsvlakke van teikengene vergelyk is, is die geenuitdrukkings van IL-4, IL-17 en IFN-γ aansienlik verhoog in die NPE-groep in vergelyking met dié van die ME-groep en die skynoperasiegroep (Fig. 4). (P < 0,05). In vergelyking met die skynoperasiegroep, het die uitdrukkingsvlakke van IL-4, IL-17 en IFN-γ in die ME-groep net effens toegeneem en het nie statistiese verandering (P > 0.05) bereik nie.
Die mRNA-uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ in die NPE-groep het 'n beduidend hoër neiging getoon as dié in die skynoperasiegroep en die ME-groep (P < 0.05).
Daarteenoor het die uitdrukkingsvlakke in die ME-groep geen betekenisvolle verskil getoon nie (P>0.05).
Western klad analise is uitgevoer met behulp van kommersieel beskikbare teenliggaampies teen IL-4 en IL-17 om die veranderde mRNA uitdrukkingspatroon te bevestig. Soos getoon in Figure 5A,B, in vergelyking met die ME-groep en die skynoperasiegroep, was die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 in die NPE-groep aansienlik verhoog (P < 0.05). In vergelyking met die skynoperasiegroep het die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 in die ME-groep ook nie statisties beduidende veranderinge (P> 0.05) bereik nie.
(A) Die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 in die NPE-groep was aansienlik hoër as dié in die ME-groep en placebo-groep (P <0.05). (B) Western blot histogram.
As gevolg van die beperkte aantal menslike monsters wat tydens chirurgie verkry is, is duidelike en gedetailleerde studies oor die patogenese van MC ietwat moeilik. Ons het gepoog om 'n diermodel van MC te vestig om die potensiële patologiese meganismes daarvan te bestudeer. Terselfdertyd is radiologiese evaluasie, histologiese evaluasie en molekulêre biologiese evaluasie gebruik om die verloop van MC geïnduseer deur NP outotransplantaat te volg. As gevolg hiervan het die NP-inplantingsmodel 'n geleidelike verandering in seinintensiteit van 12-week- tot 20-week-tydpunte tot gevolg gehad (gemengde lae sein in T1W-reekse en lae sein in T2W-reekse), wat weefselveranderinge aandui, en die histologiese en molekulêre biologiese evaluasies het die resultate van die radiologiese studie bevestig.
Die resultate van hierdie eksperiment toon dat visuele en histologiese veranderinge plaasgevind het by die plek van vertebrale liggaamsbreuk in die NPE-groep. Terselfdertyd is die uitdrukking van IL-4-, IL-17- en IFN-γ-gene, sowel as IL-4, IL-17 en IFN-γ waargeneem, wat aandui dat die inbreukmaking van outoloë nucleus pulposus-weefsel in die vertebrale liggaam kan 'n reeks sein- en morfologiese veranderinge veroorsaak. Dit is maklik om te vind dat die seinkenmerke van die vertebrale liggame van die diermodel (lae sein in die T1W-volgorde, gemengde sein en lae sein in die T2W-volgorde) baie soortgelyk is aan dié van menslike werwelselle, en die MRI-eienskappe ook bevestig die waarnemings van histologie en bruto anatomie, dit wil sê die veranderinge in die vertebrale liggaamselle is progressief. Alhoewel die inflammatoriese reaksie wat veroorsaak word deur akute trauma kort na punksie kan verskyn, het MRI-resultate getoon dat progressief toenemende seinveranderinge 12 weke na punksie verskyn het en tot 20 weke voortduur sonder enige tekens van herstel of omkering van MRI-veranderinge. Hierdie resultate dui daarop dat outoloë vertebrale NP 'n betroubare metode is om progressiewe MV in konyne te vestig.
Hierdie punksiemodel vereis voldoende vaardigheid, tyd en chirurgiese inspanning. In voorlopige eksperimente kan disseksie of oormatige stimulasie van die paravertebrale ligamente strukture lei tot die vorming van vertebrale osteofiete. Sorg moet gedra word om nie die aangrensende skyfies te beskadig of te irriteer nie. Aangesien die diepte van penetrasie beheer moet word om konsekwente en reproduceerbare resultate te verkry, het ons met die hand 'n prop gemaak deur die skede van 'n 3 mm lange naald af te sny. Die gebruik van hierdie prop verseker eenvormige boordiepte in die vertebrale liggaam. In voorlopige eksperimente het drie ortopediese chirurge wat by die operasie betrokke was, gevind dat 16-gauge-naalde makliker is om mee te werk as 18-gauge-naalde of ander metodes. Om oormatige bloeding tydens boor te vermy, sal die naald vir 'n rukkie stilhou 'n meer geskikte insteekgat verskaf, wat daarop dui dat 'n sekere mate van MC op hierdie manier beheer kan word.
Alhoewel baie studies MC geteiken het, is min bekend oor die etiologie en patogenese van MC25,26,27. Gebaseer op ons vorige studies, het ons gevind dat outo-immuniteit 'n sleutelrol speel in die voorkoms en ontwikkeling van MC12. Hierdie studie het die kwantitatiewe uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ ondersoek, wat die hoof differensiasie weë van CD4+ selle is na antigeen stimulasie. In ons studie, in vergelyking met die negatiewe groep, het die NPE-groep hoër uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ gehad, en die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 was ook hoër.
Klinies word IL-17 mRNA-uitdrukking verhoog in NP-selle van pasiënte met skyfherniasie28. Verhoogde IL-4 en IFN-γ uitdrukkingsvlakke is ook gevind in 'n akute nie-kompressiewe skyfherniasie model in vergelyking met gesonde kontroles29. IL-17 speel 'n sleutelrol in inflammasie, weefselbesering in outo-immuun siektes30 en verhoog die immuunrespons op IFN-γ31. Verbeterde IL-17-gemedieerde weefselbesering is aangemeld in MRL/lpr muise32 en outo-immuniteit vatbare muise33. IL-4 kan die uitdrukking van pro-inflammatoriese sitokiene (soos IL-1β en TNFα) en makrofaagaktivering inhibeer34. Daar is gerapporteer dat die mRNA-uitdrukking van IL-4 verskillend was in die NPE-groep in vergelyking met IL-17 en IFN-γ op dieselfde tydstip; Die mRNA uitdrukking van IFN-γ in die NPE groep was betekenisvol hoër as dié in die ander groepe. Daarom kan IFN-γ-produksie 'n bemiddelaar wees van die inflammatoriese respons wat deur NP-interkalasie geïnduseer word. Studies het getoon dat IFN-γ deur verskeie seltipes geproduseer word, insluitend geaktiveerde tipe 1-helper-T-selle, natuurlike moordenaarselle en makrofage35,36, en is 'n sleutel pro-inflammatoriese sitokien wat immuunresponse bevorder37.
Hierdie studie dui daarop dat outo-immuunrespons betrokke kan wees by die voorkoms en ontwikkeling van MC. Luoma et al. gevind dat die sein eienskappe van MC en prominente NP soortgelyk is op MRI, en beide toon hoë sein in T2W volgorde38. Daar is bevestig dat sommige sitokiene nou geassosieer word met die voorkoms van MC, soos IL-139. Ma et al. het voorgestel dat die opwaartse of afwaartse uitsteeksel van NP 'n groot invloed op die voorkoms en ontwikkeling van MC12 kan hê. Bobechko40 en Herzbein et al.41 het gerapporteer dat NP 'n immunotolerante weefsel is wat nie vanaf geboorte die vaskulêre sirkulasie kan binnedring nie. NP-uitsteeksels bring vreemde liggame in die bloedtoevoer in, waardeur plaaslike outo-immuunreaksies bemiddel42. Outo-immuunreaksies kan 'n groot aantal immuunfaktore veroorsaak, en wanneer hierdie faktore voortdurend aan weefsels blootgestel word, kan dit veranderinge in sein43 veroorsaak. In hierdie studie is ooruitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ tipiese immuunfaktore, wat die noue verwantskap tussen NP en MCs44 verder bewys. Hierdie diermodel boots die NP-deurbraak en toetrede tot die eindplaat goed na. Hierdie proses het verder die impak van outo-immuniteit op MC aan die lig gebring.
Soos verwag, bied hierdie diermodel ons 'n moontlike platform om MC te bestudeer. Hierdie model het egter steeds 'n paar beperkings: eerstens, tydens die dierewaarnemingsfase, moet sommige intermediêre-stadium hase doodgemaak word vir histologiese en molekulêre biologie toetse, so sommige diere "val buite gebruik" mettertyd. Tweedens, hoewel drie tydpunte in hierdie studie gestel word, het ons ongelukkig net een tipe MC (Modic tipe I verandering) gemodelleer, so dit is nie genoeg om die menslike siekte-ontwikkelingsproses voor te stel nie, en meer tydpunte moet gestel word om beter al die seinveranderinge waarneem. Derdens kan die veranderinge in weefselstruktuur inderdaad duidelik deur histologiese kleuring aangetoon word, maar sommige gespesialiseerde tegnieke kan die mikrostrukturele veranderinge in hierdie model beter openbaar. Byvoorbeeld, gepolariseerde ligmikroskopie is gebruik om die vorming van fibrokraakbeen in konyne intervertebrale skywe te ontleed45. Die langtermyn-effekte van NP op MC en eindplaat vereis verdere studie.
Vier-en-vyftig manlike Nieu-Seelandse wit hase (gewig ongeveer 2,5-3 kg, ouderdom 3-3,5 maande) is ewekansig verdeel in skynoperasiegroep, spierinplantingsgroep (ME-groep) en senuweewortelinplantingsgroep (NPE-groep). Alle eksperimentele prosedures is deur die Etiese Komitee van Tianjin Hospitaal goedgekeur, en die eksperimentele metodes is streng in ooreenstemming met die goedgekeurde riglyne uitgevoer.
Sommige verbeterings is aangebring aan die chirurgiese tegniek van S. Sobajima 46. Elke konyn is in 'n laterale ligposisie geplaas en die anterior oppervlak van vyf opeenvolgende lumbale intervertebrale skyfies (IVD's) is blootgestel met 'n posterolaterale retroperitoneale benadering. Elke haas is algemene narkose (20% uretaan, 5 ml/kg via die aar) gegee. 'n Langsige velinsnyding is gemaak vanaf die onderrand van die ribbes tot by die bekkenrand, 2 cm ventraal na die paravertebrale spiere. Die regter anterolaterale ruggraat van L1 tot L6 is blootgestel deur skerp en stomp disseksie van die oorliggende subkutane weefsel, retroperitoneale weefsel en spiere (Fig. 6A). Die skyfvlak is bepaal deur die bekkenrand as 'n anatomiese landmerk vir die L5-L6 skyfvlak te gebruik. Gebruik 'n 16-gauge punksienaald om 'n gat naby die eindplaat van die L5-werwel tot 'n diepte van 3 mm te boor (Fig. 6B). Gebruik 'n 5-ml spuit om die outoloë nucleus pulposus in die L1-L2 intervertebrale skyf te aspireer (Fig. 6C). Verwyder die nucleus pulposus of spier volgens die vereistes van elke groep. Nadat die boorgat verdiep is, word absorbeerbare hechtings op die diep fascia, oppervlakkige fascia en vel geplaas, met sorg dat nie die periosteale weefsel van die vertebrale liggaam tydens chirurgie beskadig word nie.
(A) Die L5-L6 skyf word blootgestel via 'n posterolaterale retroperitoneale benadering. (B) Gebruik 'n 16-maat naald om 'n gat naby die L5 eindplaat te boor. (C) Outoloë MF'e word geoes.
Algemene narkose is toegedien met 20% uretaan (5 ml/kg) toegedien via die ooraar, en lumbale ruggraat radiografieë is 12, 16 en 20 weke postoperatief herhaal.
Konyne is geoffer deur binnespierse inspuiting van ketamien (25.0 mg/kg) en binneaarse natriumpentobarbital (1.2 g/kg) op 12, 16 en 20 weke na die operasie. Die hele ruggraat is verwyder vir histologiese analise en werklike analise is uitgevoer. Kwantitatiewe omgekeerde transkripsie (RT-qPCR) en Western blotting is gebruik om veranderinge in immuunfaktore op te spoor.
MRI-ondersoeke is uitgevoer in konyne met behulp van 'n 3.0 T kliniese magneet (GE Medical Systems, Florence, SC) toegerus met 'n ortogonale ledemaat spoel ontvanger. Konyne is verdoof met 20% uretaan (5 mL/kg) via die oor-aar en dan rugliggende binne die magneet geplaas met die lumbale gebied gesentreer op 'n 5-duim deursnee sirkelvormige oppervlakspoel (GE Medical Systems). Koronale T2-geweegde lokalisatorbeelde (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) is verkry om die ligging van die lumbale skyf van L3-L4 tot L5-L6 te definieer. Sagittale vlak T2-geweegde skywe is verkry met die volgende instellings: vinnige spin-eggo volgorde met 'n herhalingstyd (TR) van 2200 ms en 'n eggo tyd (TE) van 70 ms, matriks; visuele veld van 260 en agt stimuli; Die snydikte was 2 mm, die gaping was 0,2 mm.
Nadat die laaste foto geneem is en die laaste haas doodgemaak is, is die skyn-, spier-ingebedde en NP-skyfies verwyder vir histologiese ondersoek. Weefsels is vir 1 week in 10% neutraal gebufferde formalien vasgemaak, met etileendiamientetra-asynsuur ontkalk en paraffien gesny. Weefselblokke is in paraffien ingebed en in sagittale snitte (5 μm dik) gesny met 'n mikrotoom. Seksies is gekleur met hematoksilien en eosien (H&E).
Nadat die intervertebrale skyfies van die hase in elke groep versamel is, is totale RNA onttrek met behulp van 'n UNIQ-10 kolom (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) volgens die vervaardiger se instruksies en 'n ImProm II omgekeerde transkripsiestelsel (Promega Inc. , Madison, WI, VSA). Omgekeerde transkripsie is uitgevoer.
RT-qPCR is uitgevoer met behulp van 'n Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., VSA) en SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VSA) volgens die vervaardiger se instruksies. Die PCR-reaksievolume was 20 μl en het 1.5 μl verdunde cDNA en 0.2 μM van elke primer bevat. Primers is ontwerp deur OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) en vervaardig deur Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Tabel 1). Die volgende termiese siklustoestande is gebruik: aanvanklike polimerase-aktiveringstap by 94°C vir 2 min, dan 40 siklusse van 15 s elk by 94°C vir templaatdenaturering, uitgloeiing vir 1 min by 60°C, verlenging en fluoressensie. metings is vir 1 minuut by 72°C uitgevoer. Alle monsters is drie keer geamplifiseer en die gemiddelde waarde is gebruik vir RT-qPCR analise. Amplifikasie data is ontleed met behulp van FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, VSA). IL-4, IL-17 en IFN-γ geenuitdrukking is genormaliseer na die endogene kontrole (ACTB). Relatiewe uitdrukkingsvlakke van teiken-mRNA is met behulp van die 2-ΔΔCT metode bereken.
Totale proteïen is uit weefsels onttrek met behulp van 'n weefselhomogeniseerder in RIPA-lisisbuffer (wat 'n protease- en fosfatase-inhibeerder-skemerkelkie bevat) en dan gesentrifugeer teen 13 000 rpm vir 20 minute by 4°C om weefselafval te verwyder. Vyftig mikrogram proteïen is per baan gelaai, geskei deur 10% SDS-PAGE, en dan oorgedra na 'n PVDF membraan. Blokkering is uitgevoer in 5% nie-vet droë melk in Tris-gebufferde soutoplossing (TBS) wat 0.1% Tween 20 bevat het vir 1 uur by kamertemperatuur. Die membraan is oornag by 4°C geïnkubeer met konyn anti-dekorien primêre teenliggaampie (verdun 1:200; Boster, Wuhan, China) (verdun 1:200; Bioss, Beijing, China) en het op die tweede dae gereageer; met sekondêre teenliggaampies (bok anti-konyn immunoglobulien G teen 1:40 000 verdunning) gekombineer met peperwortelperoksidase (Boster, Wuhan, China) vir 1 uur by kamertemperatuur. Westerse klad seine is opgespoor deur verhoogde chemiluminescentie op die chemiluminescerende membraan na X-straal bestraling. Vir densitometriese analise, is klade geskandeer en gekwantifiseer deur gebruik te maak van BandScan sagteware en die resultate is uitgedruk as die verhouding van teikengeen immunoreaktiwiteit tot tubulien immunoreaktiwiteit.
Statistiese berekeninge is uitgevoer met behulp van die SPSS16.0 sagteware pakket (SPSS, VSA). Data wat tydens die studie ingesamel is, is uitgedruk as gemiddelde ± standaardafwyking (gemiddeld ± SD) en geanaliseer deur gebruik te maak van eenrigting herhaalde metings analise van variansie (ANOVA) om verskille tussen die twee groepe te bepaal. P < 0.05 is as statisties beduidend beskou.
Dus, die vestiging van 'n diermodel van MC deur outoloë NP's in die vertebrale liggaam in te plant en makroanatomiese waarneming, MRI-analise, histologiese evaluering en molekulêre biologiese analise uit te voer, kan 'n belangrike hulpmiddel word vir die assessering en begrip van die meganismes van menslike MC en die ontwikkeling van nuwe terapeutiese middels. ingrypings.
Hoe om hierdie artikel aan te haal: Han, C. et al. 'n Dieremodel van Modic veranderinge is gevestig deur outoloë nucleus pulposus in die subchondrale been van die lumbale ruggraat in te plant. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., en Boos, N. Magnetiese resonansiebeelding van die lumbale ruggraat: voorkoms van skyfherniasie en -retensie, senuweewortelkompressie, eindplaat-abnormaliteite en fasetgewrig-osteoartritis by asimptomatiese vrywilligers . koers. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, en Leboeuf-Eed, K. Modic veranderinge en hul verhouding tot kliniese bevindinge. European Spine Journal: amptelike publikasie van die European Spine Society, die European Society of Spinal Deformity, en die European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Modiese veranderinge in die lumbale vertebrale eindplate: voorkoms en assosiasie met lae rugpyn en sciatica by middeljarige manlike werkers. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., en Dalinka, M. MRI van beenmurgveranderinge naby die eindplaat in degeneratiewe siekte van die lumbale ruggraat. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, en Carter, JR Degeneratiewe skyfsiekte: evaluering van vertebrale murgveranderinge met MRI. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, en Carter, JR Beeldvorming van degeneratiewe skyfsiekte. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Voorspellers van neovertebrale eindplaat (Modic) sein veranderinge in die algemene bevolking. European Spine Journal: Official Publication of the European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity, and the European Society for Servical Spine Research, Afdeling 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB en Mannisch, K. Modic verander na lumbale skyfherniasie. European Spine Journal : Amptelike publikasie van die European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity and the European Society for Cervical Spine Research 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., en Kaapa, E. Modic tipe I veranderinge kan vinnig progressiewe deformasie skyfdegenerasie voorspel: 'n 1-jaar voornemende studie. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ en Fan, SW Modiese veranderinge: moontlike oorsake en bydrae tot lumbale skyfdegenerasie. Medical Hipotheses 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Interne skyfbreuk. Skyfprolapsprobleme oor 50 jaar. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Postyd: 13 Desember 2024