Dankie dat u Nature.com besoek het. Die blaaierweergawe wat u gebruik, het beperkte CSS -ondersteuning. Vir die beste resultate, beveel ons aan dat u 'n nuwer blaaier gebruik (of die versoenbaarheidsmodus in Internet Explorer deaktiveer). Om die voortgesette ondersteuning te verseker, sal ons die webwerf sonder style en JavaScript vertoon.
Die vestiging van dieremodelle van modiese verandering (MC) is 'n belangrike basis vir die bestudering van MC. Vier-en-vyftig Nieu-Seelandse wit konyne is verdeel in 'n skelm-operasiegroep, spierinplantingsgroep (ME-groep) en Nucleus Pulposus-inplantingsgroep (NPE Group). In die NPE -groep is die intervertebrale skyf blootgestel deur anterolaterale lumbale chirurgiese benadering en is 'n naald gebruik om die L5 -werwelliggaam naby die eindplaat te peit. NP is deur 'n spuit uit die L1/2 -intervertebrale skyf onttrek en daarin ingespuit. Boor 'n gat in die subchondrale been. Die chirurgiese prosedures en boormetodes in die spierinplantingsgroep en die sham-operasiegroep was dieselfde as dié in die NP-inplantingsgroep. In die ME-groep is 'n stuk spier in die gat geplaas, terwyl daar in die skelm-operasiegroep niks in die gat geplaas is nie. Na die operasie is MRI -skandering en molekulêre biologiese toetsing uitgevoer. Die sein in die NPE-groep het verander, maar daar was geen ooglopende seinverandering in die groep met 'n skelm-operasie en die ME-groep nie. Histologiese waarneming het getoon dat abnormale weefselproliferasie op die inplantingsplek waargeneem is, en die uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-y is in die NPE-groep verhoog. Inplanting van NP in die subchondrale been kan 'n dieremodel van MC vorm.
Modiese veranderinge (MC) is letsels van die vertebrale eindplate en aangrensende beenmurg sigbaar op magnetiese resonansbeelding (MRI). Dit kom baie gereeld voor by individue met gepaardgaande simptome1. Baie studies het die belangrikheid van MC beklemtoon as gevolg van die assosiasie met lae rugpyn (LBP) 2,3. De Roos et al.4 en Modic et al.5 het onafhanklik drie verskillende soorte subchondrale seinafwykings in die vertebrale beenmurg beskryf. Modiese tipe I-veranderinge is hipointense op T1-geweegde (T1W) rye en hiperintense op T2-geweegde (T2W) rye. Hierdie letsel onthul fissuur -eindplate en aangrensende vaskulêre korrelweefsel in die beenmurg. Modiese tipe II -veranderinge toon hoë sein op beide T1W- en T2W -reekse. In hierdie tipe letsel kan die vernietiging van die eindplaat gevind word, sowel as histologiese vetterige vervanging van die aangrensende beenmurg. Modiese tipe III -veranderinge toon 'n lae sein in T1W- en T2W -rye. Sklerotiese letsels wat ooreenstem met die eindplate, is waargeneem6. MC word beskou as 'n patologiese siekte van die ruggraat en hou nou verband met baie degeneratiewe siektes van die ruggraat7,8,9.
Met inagneming van die beskikbare gegewens, het verskeie studies gedetailleerde insigte in die etiologie en patologiese meganismes van MC verskaf. Albert et al. het voorgestel dat MC deur skyfherniation8 veroorsaak kan word. Hu et al. MC toegeskryf aan ernstige skyfdegenerasie10. KROC het die konsep van 'interne skyfbreuk' voorgestel, wat sê dat herhalende skyftrauma tot mikrotears in die eindplaat kan lei. Na gesplete vorming kan die vernietiging van die eindplaat deur die Nucleus Pulposus (NP) 'n outo -immuunrespons veroorsaak, wat verder lei tot die ontwikkeling van MC11. Ma et al. het 'n soortgelyke siening gedeel en berig dat NP-geïnduseerde outo-immuniteit 'n sleutelrol speel in die patogenese van MC12.
Immuunstelselselle, veral CD4+ T -helper -limfosiete, speel 'n kritieke rol in die patogenese van outo -immuniteit13. Die onlangs ontdekte TH17-subset produseer die proinflammatoriese sitokien IL-17, bevorder chemokienuitdrukking en stimuleer T-selle in beskadigde organe om IFN-γ14 te produseer. Th2 -selle speel ook 'n unieke rol in die patogenese van immuunrespons. Uitdrukking van IL-4 as 'n verteenwoordigende Th2-sel kan lei tot ernstige immunopatologiese gevolge15.
Alhoewel baie kliniese studies op MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 uitgevoer is, is daar steeds 'n gebrek aan geskikte eksperimentele diere wat die MC -proses kan naboots wat gereeld by mense voorkom en kan wees Word gebruik om die etiologie of nuwe behandelings soos geteikende terapie te ondersoek. Tot op hede is daar volgens slegs enkele dieremodelle van MC die onderliggende patologiese meganismes bestudeer.
Op grond van die outo -immuunteorie wat deur Albert en MA voorgestel is, het hierdie studie 'n eenvoudige en reproduceerbare konyn -MC -model opgestel deur NP Autotransplanting NP naby die geboorde werwel -eindplaat te autotransplant. Ander doelstellings is om die histologiese eienskappe van die dieremodelle waar te neem en die spesifieke meganismes van NP in die ontwikkeling van MC te evalueer. Vir hierdie doel gebruik ons tegnieke soos molekulêre biologie, MRI en histologiese studies om die progressie van MC te bestudeer.
Twee konyne is tydens die operasie aan bloeding dood, en vier konyne het tydens narkose tydens MRI gesterf. Die oorblywende 48 konyne het oorleef en het na die operasie geen gedrags- of neurologiese tekens getoon nie.
MRI toon dat die seinintensiteit van die ingebedde weefsel in verskillende gate anders is. Die seinintensiteit van die L5 -vertebrale liggaam in die NPE -groep het geleidelik verander op 12, 16 en 20 weke na invoeging (T1W -volgorde het 'n lae sein getoon, en die T2W -volgorde het gemengde sein plus lae sein getoon) (Fig. 1C), terwyl die MRI -optredes getoon het van die ander twee groepe ingebedde dele het gedurende dieselfde periode relatief stabiel gebly (Fig. 1A, B).
(A) Verteenwoordigende opeenvolgende MRI's van die konyn -lumbale ruggraat op 3 tydpunte. Geen seinafwykings is gevind in die beelde van die sham-operasiegroep nie. (B) Die seinkenmerke van die werwelliggaam in die ME-groep is soortgelyk aan dié in die skelm-operasiegroep, en geen noemenswaardige seinverandering word mettertyd op die inbedding waargeneem nie. (C) In die NPE -groep is die lae sein duidelik sigbaar in die T1W -volgorde, en die gemengde sein en lae sein is duidelik sigbaar in die T2W -volgorde. Van die 12-week-periode tot die periode van 20 weke neem die sporadiese hoë seine rondom die lae seine in die T2W-volgorde af.
Voor die hand liggende beenhiperplasie kan gesien word op die inplantingsplek van die werwelliggaam in die NPE -groep, en die beenhiperplasie kom vinniger van 12 tot 20 weke voor (Fig. 2C) in vergelyking met die NPE -groep, geen noemenswaardige verandering word waargeneem in die gemodelleerde vertebraal liggame; Sham Group en Me Group (Fig. 2C) 2A, b).
(A) Die oppervlak van die werwelliggaam by die ingeplante gedeelte is baie glad, die gat genees goed, en daar is geen hiperplasie in die werwelliggaam nie. (B) Die vorm van die ingeplante webwerf in die ME -groep is soortgelyk aan dié in die Sham Operation Group, en daar is geen duidelike verandering in die voorkoms van die ingeplante terrein mettertyd nie. (C) Beenhiperplasie het op die ingeplante terrein in die NPE -groep voorgekom. Die beenhiperplasie het vinnig toegeneem en selfs deur die intervertebrale skyf na die kontralaterale werwelliggaam verleng.
Histologiese analise bied meer gedetailleerde inligting oor beenvorming. Figuur 3 toon die foto's van die postoperatiewe afdelings wat met H&E gevlek is. In die groep met 'n skelm-operasie was die chondrocyten goed gerangskik en geen selproliferasie is opgespoor nie (Fig. 3A). Die situasie in die ME-groep was soortgelyk aan dié in die Sham-operasiegroep (Fig. 3b). In die NPE-groep is 'n groot aantal chondrocyten en verspreiding van NP-agtige selle egter op die inplantingsplek waargeneem (Fig. 3C);
(A) Trabeculae kan naby die eindplaat gesien word, die chondrocyte is netjies gerangskik met eenvormige selgrootte en vorm en geen verspreiding nie (40 keer). (B) Die toestand van die inplantingsplek in die ME -groep is soortgelyk aan dié van die sham -groep. Trabeculae en chondrocyten kan gesien word, maar daar is geen duidelike verspreiding op die inplantingsplek (40 keer) nie. (B) Daar kan gesien word dat chondrocytes en NP-agtige selle aansienlik vermeerder, en die vorm en grootte van chondrocyten is ongelyk (40 keer).
Die uitdrukking van interleukien 4 (IL-4) mRNA, interleukien 17 (IL-17) mRNA, en interferon γ (IFN-γ) mRNA is in beide die NPE- en ME-groepe waargeneem. Toe die uitdrukkingsvlakke van teikengene vergelyk is, is die geenuitdrukkings van IL-4, IL-17 en IFN-y aansienlik verhoog in die NPE-groep in vergelyking met dié van die ME-groep en die Sham-operasionele groep (Fig. 4) (P <0,05). In vergelyking met die sham-operasionele groep, het die uitdrukkingsvlakke van IL-4, IL-17 en IFN-y in die ME-groep slegs effens toegeneem en nie statistiese verandering bereik nie (P> 0,05).
Die mRNA-uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-y in die NPE-groep het 'n aansienlik hoër neiging getoon as dié in die Sham Operation Group en die ME-groep (P <0,05).
In teenstelling hiermee het die uitdrukkingsvlakke in die ME -groep geen noemenswaardige verskil getoon nie (p> 0,05).
Western blot-analise is uitgevoer met behulp van kommersieel beskikbare teenliggaampies teen IL-4 en IL-17 om die veranderde mRNA-uitdrukkingspatroon te bevestig. Soos getoon in Figuur 5A, B, in vergelyking met die ME-groep en die sham-operasionele groep, is die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 in die NPE-groep aansienlik verhoog (P <0,05). In vergelyking met die sham-operasionele groep, kon die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 in die ME-groep ook nie statisties beduidende veranderinge bereik nie (p> 0,05).
(A) Die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 in die NPE-groep was aansienlik hoër as dié in die ME-groep en placebo-groep (P <0,05). (B) Western blot histogram.
As gevolg van die beperkte aantal menslike monsters wat tydens chirurgie verkry is, is duidelike en gedetailleerde studies oor die patogenese van MC ietwat moeilik. Ons het probeer om 'n dieremodel van MC te vestig om sy potensiële patologiese meganismes te bestudeer. Terselfdertyd is radiologiese evaluering, histologiese evaluering en molekulêre biologiese evaluering gebruik om die verloop van MC wat deur NP Autotraft geïnduseer is, te volg. As gevolg hiervan het die NP-inplantingsmodel gelei tot 'n geleidelike verandering in seinintensiteit van 12-week tot 20-week tydpunte (gemengde lae sein in T1W-rye en 'n lae sein in T2W-rye), wat weefselveranderings aandui, en die histologiese en molekulêre Biologiese evaluerings het die resultate van die radiologiese studie bevestig.
Die resultate van hierdie eksperiment toon dat visuele en histologiese veranderinge plaasgevind het op die plek van die inbreuk op die werwelliggaam in die NPE -groep. Terselfdertyd is die uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ-gene, sowel as IL-4, IL-17 en IFN-y, waargeneem, wat daarop dui dat die inbreuk op outoloë kernweefsel in die vertebrale inbreuk maak Liggaam kan 'n reeks sein- en morfologiese veranderinge veroorsaak. Dit is maklik om te vind dat die seinkenmerke van die werwelliggame van die dieremodel (lae sein in die T1W -volgorde, gemengde sein en 'n lae sein in die T2W -volgorde) baie ooreenstem met dié van menslike werwelselle, en ook die MRI -eienskappe Bevestig die waarnemings van histologie en growwe anatomie, dit wil sê die veranderinge in die vertebrale liggaamselle is progressief. Alhoewel die inflammatoriese respons wat deur akute trauma veroorsaak word, kort ná die punksie kan voorkom, het MRI -resultate getoon dat geleidelik toenemende seinveranderinge 12 weke na die punksie verskyn het en tot 20 weke voortgeduur het sonder enige tekens van herstel of omkeer van MRI -veranderinge. Hierdie resultate dui daarop dat outoloë vertebrale NP 'n betroubare metode is om progressiewe MV by konyne te vestig.
Hierdie punksie -model verg voldoende vaardigheid, tyd en chirurgiese inspanning. In voorlopige eksperimente kan disseksie of oormatige stimulering van die paravertebrale ligamentagtige strukture lei tot die vorming van werwel -osteofiete. Sorg moet gedra word om nie die aangrensende skyfies te beskadig of te irriteer nie. Aangesien die diepte van penetrasie beheer moet word om konsekwente en reproduceerbare resultate te verkry, het ons 'n prop met die hand gemaak deur die skede van 'n 3 mm lange naald af te sny. Die gebruik van hierdie prop verseker eenvormige boordiepte in die vertebrale liggaam. In voorlopige eksperimente het drie ortopediese chirurge wat by die operasie betrokke was, gevind dat 16-met naalde makliker is om met naalde of ander metodes te werk. Om oormatige bloeding tydens boorwerk te vermy, sal die naald nog 'n rukkie 'n meer geskikte invoeggat bied, wat daarop dui dat 'n sekere mate van MC op hierdie manier beheer kan word.
Alhoewel baie studies MC geteiken het, is min bekend oor die etiologie en patogenese van MC25,26,27. Op grond van ons vorige studies, het ons gevind dat outo -immuniteit 'n sleutelrol speel in die voorkoms en ontwikkeling van MC12. Hierdie studie het die kwantitatiewe uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-y ondersoek, wat die belangrikste onderskeidingsweë van CD4+ -selle is na antigeenstimulasie. In ons studie, in vergelyking met die negatiewe groep, het die NPE-groep 'n hoër uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-y gehad, en die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 was ook hoër.
Klinies word IL-17 mRNA-uitdrukking verhoog in NP-selle van pasiënte met skyfherniasie28. Verhoogde IL-4- en IFN-y-uitdrukkingsvlakke is ook gevind in 'n akute nie-kompressiewe skyfherniasie-model in vergelyking met gesonde kontroles29. IL-17 speel 'n sleutelrol in inflammasie, weefselbesering in outo-immuun siektes30 en verhoog die immuunrespons op IFN-y31. Verbeterde IL-17-gemedieerde weefselbesering is in MRL/LPR MICE32 en outo-immuniteit-vatbare muise33 gerapporteer. IL-4 kan die uitdrukking van proinflammatoriese sitokiene (soos IL-1β en TNFα) en makrofage-aktivering34 belemmer. Daar is berig dat die mRNA-uitdrukking van IL-4 in die NPE-groep anders was in vergelyking met IL-17 en IFN-y op dieselfde tydstip; Die mRNA-uitdrukking van IFN-y in die NPE-groep was beduidend hoër as in die ander groepe. Daarom kan IFN-y-produksie 'n bemiddelaar wees van die inflammatoriese respons wat deur NP-interkalasie veroorsaak word. Studies het getoon dat IFN-γ geproduseer word deur veelvuldige seltipes, insluitend geaktiveerde tipe 1-helper T-selle, natuurlike moordenaarselle en makrofage35,36, en 'n belangrike pro-inflammatoriese sitokien is wat immuunresponse37 bevorder.
Hierdie studie dui daarop dat outo -immuunrespons betrokke kan wees by die voorkoms en ontwikkeling van MC. Luoma et al. het gevind dat die seinkenmerke van MC en prominente NP soortgelyk is aan MRI, en dat albei 'n hoë sein in T2W -volgorde38 toon. Daar is bevestig dat sommige sitokiene nou verband hou met die voorkoms van MC, soos IL-139. Ma et al. het voorgestel dat die opwaartse of afwaartse uitsteeksel van NP 'n groot invloed op die voorkoms en ontwikkeling van MC12 kan hê. BOBECHKO40 en Herzbein et al.41 het berig dat NP 'n immunotolerante weefsel is wat nie van die geboorte af die vaskulêre sirkulasie kan binnedring nie. NP -uitsteeksels stel vreemde liggame in die bloedtoevoer, waardeur die plaaslike outo -immuunreaksies 40 bemiddel word42. Outo -immuunreaksies kan 'n groot aantal immuunfaktore veroorsaak, en as hierdie faktore voortdurend aan weefsels blootgestel word, kan dit veranderinge in seine veroorsaak43. In hierdie studie is die ooruitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-y tipiese immuunfaktore, wat die noue verband tussen NP en MCS44 verder bewys. Hierdie dieremodel boots die NP -deurbraak en toegang tot die eindplaat na. Hierdie proses het verder die impak van outo -immuniteit op MC aan die lig gebring.
Soos verwag, bied hierdie dieremodel ons 'n moontlike platform om MC te bestudeer. Hierdie model het egter steeds 'n paar beperkings: eerstens, gedurende die diere-waarnemingsfase, moet sommige tussentydse konyne ge-euthaniseer word vir histologiese en molekulêre biologie-toetsing, so sommige diere "val buite gebruik". Tweedens, hoewel drie tydpunte in hierdie studie ingestel is, het ons ongelukkig slegs een soort MC (modiese tipe I -verandering) gemodelleer, dus is dit nie genoeg om die proses van menslike siekte te verteenwoordig nie, en meer tydpunte moet ingestel word op Let beter op al die seinveranderings. Derdens kan die veranderinge in weefselstruktuur inderdaad duidelik getoon word deur histologiese kleuring, maar sommige gespesialiseerde tegnieke kan die mikrostrukturele veranderinge in hierdie model beter openbaar. Byvoorbeeld, gepolariseerde ligmikroskopie is gebruik om die vorming van fibrocartilage in konyn -intervertebrale skyfies45 te ontleed. Die langtermyn-effekte van NP op MC en eindplaat benodig verdere studie.
Vier-en-vyftig manlike Nieu-Seelandse wit konyne (gewig van ongeveer 2,5-3 kg, ouderdom 3-3,5 maande) is willekeurig verdeel in die groep van die sham-operasie, spierinplantingsgroep (ME-groep) en senuwee-wortelinplantingsgroep (NPE Group). Al die eksperimentele prosedures is deur die Etiekkomitee van die Tianjin -hospitaal goedgekeur, en die eksperimentele metodes is uitgevoer in ooreenstemming met die goedgekeurde riglyne.
Sommige verbeterings is aangebring aan die chirurgiese tegniek van S. Sobajima 46. Elke konyn is in 'n sywaartse posisie geplaas en die anterior oppervlak van vyf opeenvolgende lumbale intervertebrale skyfies (IVD's) is blootgestel met behulp van 'n posterolaterale retroperitoneale benadering. Elke konyn het algemene narkose gekry (20% uretaan, 5 ml/kg via die ooraar). 'N Longitudinale vel -insnyding is van die onderrand van die ribbes tot by die bekkenrand, 2 cm ventrale tot by die paravertebrale spiere gemaak. Die regter anterolaterale ruggraat van L1 tot L6 is blootgestel deur skerp en stomp disseksie van die oorliggende onderhuidse weefsel, retroperitoneale weefsel en spiere (Fig. 6A). Die skyfvlak is bepaal met behulp van die bekkenrand as 'n anatomiese landmerk vir die L5-L6-skyfvlak. Gebruik 'n punksie van 16 meter om 'n gat naby die eindplaat van die L5-werwel tot 'n diepte van 3 mm te boor (Fig. 6b). Gebruik 'n 5-ml spuit om die outoloë nucleus pulposus in die L1-L2-intervertebrale skyf te aspireer (Fig. 6C). Verwyder die kernpulposus of spier volgens die vereistes van elke groep. Nadat die boorgat verdiep is, word absorbeerbare hegtings op die diep fascia, oppervlakkige fascia en vel geplaas, en sorg dat u nie die periosteale weefsel van die werwelliggaam tydens die operasie beskadig nie.
(A) Die L5 - L6 -skyf word blootgestel via 'n posterolaterale retroperitoneale benadering. (B) Gebruik 'n naald van 16 meter om 'n gat naby die L5-eindplaat te boor. (C) Outoloë MF's word geoes.
Algemene verdowing is toegedien met 20% uretaan (5 ml/kg) wat via die oor aar toegedien is, en radiografieë van die lumbale ruggraat is op 12, 16 en 20 weke na die operasie herhaal.
Konyne is geoffer deur intramuskulêre inspuiting van ketamien (25,0 mg/kg) en intraveneuse natriumpentobarbital (1,2 g/kg) op 12, 16 en 20 weke na die operasie. Die hele ruggraat is verwyder vir histologiese analise en werklike analise is uitgevoer. Kwantitatiewe omgekeerde transkripsie (RT-qPCR) en Western blotting is gebruik om veranderinge in immuunfaktore op te spoor.
MRI -ondersoeke is uitgevoer by konyne met behulp van 'n 3.0 T kliniese magneet (GE Medical Systems, Florence, SC) wat toegerus is met 'n ortogonale ledemaatspoelontvanger. Konyne is verdoof met 20% uretaan (5 ml/kg) via die oor aar en dan rugkant in die magneet geplaas met die lumbale streek gesentreer op 'n sirkelvormige oppervlakspoel van 5 duim (GE Medical Systems). Coronal T2-geweegde lokaliseringsbeelde (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) is verkry om die ligging van die lumbale skyf van L3-L4 tot L5-L6 te definieer. Sagittal Plane T2-geweegde skywe is verkry met die volgende instellings: vinnige spin-eggo-volgorde met 'n herhalingstyd (TR) van 2200 ms en 'n eggo-tyd (TE) van 70 ms, matriks; visuele veld van 260 en agt stimuli; Die snydikte was 2 mm, die gaping was 0,2 mm.
Nadat die laaste foto geneem is en die laaste konyn doodgemaak is, is die skelm, spier-ingebed en NP-skyfies verwyder vir histologiese ondersoek. Weefsels is vir 1 week in 10% neutrale gebufferde formalien vasgemaak, ontkalk met etileendiaminetetraasynsuur en paraffien gesny. Weefselblokke is in paraffien ingebed en in sagittale gedeeltes (5 μm dik) gesny met behulp van 'n mikrotoom. Gedeeltes is met hematoksilien en eosien (H&E) gekleur.
Nadat die intervertebrale skyfies van die konyne in elke groep versamel is, is totale RNA onttrek met behulp van 'n UNIQ-10-kolom (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) volgens die instruksies van die vervaardiger en 'n IMPROM II-omgekeerde transkripsiestelsel (Promega Inc. , Madison, WI, VSA). Omgekeerde transkripsie is uitgevoer.
RT-QPCR is uitgevoer met behulp van 'n Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., VSA) en SYBR Green Jump Start Taq Readymix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VSA) volgens die instruksies van die vervaardiger. Die PCR -reaksievolume was 20 μl en bevat 1,5 μl verdunde cDNA en 0,2 μM van elke primer. Primers is ontwerp deur Oligoperfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) en vervaardig deur Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Tabel 1). Die volgende termiese fietsrytoestande is gebruik: aanvanklike polimerase -aktiveringstap by 94 ° C vir 2 minute, dan 40 siklusse van 15 s elk by 94 ° C vir die denaturering van die templaat, uitgloeiing vir 1 min by 60 ° C, verlenging en fluoressensie. Metings is vir 1 min by 72 ° C uitgevoer. Al die monsters is drie keer versterk en die gemiddelde waarde is gebruik vir RT-QPCR-analise. Versterkingsdata is geanaliseer met behulp van FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, VSA). IL-4, IL-17 en IFN-y geenuitdrukking is genormaliseer tot die endogene beheer (ACTB). Relatiewe uitdrukkingsvlakke van teiken mRNA is met behulp van die 2-ΔΔCT-metode bereken.
Totale proteïen is uit weefsels onttrek met behulp van 'n weefselhomogenisator in RIPA -lysisbuffer (wat 'n protease- en fosfatase -remmer -skemerkelkie bevat) en daarna vir 20 minute by 4 ° C by 13.000 r / min gesentrifugeer om weefselvulheid te verwyder. Vyftig mikrogram proteïen is per baan gelaai, geskei deur 10% SDS-PAGE en dan na 'n PVDF-membraan oorgedra. Blokkering is uitgevoer in 5% nie-vet droë melk in Tris-gebufferde soutoplossing (TBS) wat 0,1% Tween 20 vir 1 uur by kamertemperatuur bevat. Die membraan is geïnkubeer met 'n konyn-anti-dekorien primêre teenliggaampie (verdun 1: 200; Boster, Wuhan, China) (verdun 1: 200; Bioss, Beijing, China) oornag by 4 ° C en reageer op die tweede dae; met sekondêre teenliggaampie (bok-anti-konyn-immunoglobulien G by 1: 40,000 verdunning) gekombineer met peperwortelperoksidase (Boster, Wuhan, China) vir 1 uur by kamertemperatuur. Westerse vlekseine is opgespoor deur verhoogde chemiluminescentie op die chemiluminescerende membraan na X-straalbestraling. Vir densitometriese analise is die kolle met behulp van Bandscan -sagteware geskandeer en gekwantifiseer en die resultate is uitgedruk as die verhouding van die teikengeen -immunoreaktiwiteit tot tubulien -immunoreaktiwiteit.
Statistiese berekeninge is uitgevoer met behulp van die SPSS16.0 -sagtewarepakket (SPSS, VSA). Data wat tydens die studie versamel is, is uitgedruk as gemiddelde ± standaardafwyking (gemiddelde ± SD) en geanaliseer met behulp van eenrigting herhaalde meetanalise van variansie (ANOVA) om die verskille tussen die twee groepe te bepaal. P <0,05 is as statisties beduidend beskou.
Dus, die vestiging van 'n dieremodel van MC deur outoloë NP's in die vertebrale liggaam in te plant en makro -anatomiese waarneming, MRI -analise, histologiese evaluering en molekulêre biologiese analise uit te voer ingrypings.
Hoe om hierdie artikel aan te haal: Han, C. et al. 'N Dieremodel van modiese veranderinge is vasgestel deur outoloë nucleus pulposus in die subchondrale been van die lumbale ruggraat in te plant. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., en Boos, N. Magnetiese resonansbeelding van die lumbale ruggraat: voorkoms van skyfherniasie en retensie, senuwee -wortelkompressie, eindplaat abnormaliteite en fasetgewrig osteoartritis in asimptomatiese vrywilligers . koers. Radiologie 209, 661–666, doi: 10.1148/radiologie.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, en LeBoeuf-Ede, K. Modiese veranderinge en hul verhouding tot kliniese bevindings. European Spine Journal: Amptelike publikasie van die European Spine Society, die European Society of Spinal DeFormity, en die European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Modiese veranderinge in die lumbale vertebrale eindplate: voorkoms en assosiasie met lae rugpyn en sciatica by manlike werkers in die middeljarige ouderdom. Spine 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kresssel, H., Spritzer, K., en Dalinka, M. MRI van beenmurgveranderings naby die eindplaat in degeneratiewe siekte van die lumbale ruggraat. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, en Carter, JR Degeneratiewe skyfsiekte: evaluering van vertebrale murgveranderings met MRI. Radiologie 166, 193–199, doi: 10.1148/radiologie.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, en Carter, JR -beelding van degeneratiewe skyfsiekte. Radiologie 168, 177–186, doi: 10.1148/radiologie.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Voorspellers van neovertebrale eindplaat (modiese) seinveranderinge in die algemene bevolking. European Spine Journal: Amptelike publikasie van die European Spine Society, die European Society of Spinal DeFormity, en die European Society for Cervical Spine Research, Afdeling 19, 129–135, doi: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB en Mannisch, K. Modiese veranderinge na die herniasie van die lumbale skyf. European Spine Journal: Amptelike publikasie van die European Spine Society, The European Society of Spinal DeFormity and the European Society for Cervical Spine Research 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., en Kaapa, E. Modiese tipe I-veranderinge kan vinnig progressiewe vervormingsskyfdegenerasie voorspel: 'n 1-jaar voornemende studie. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/S00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ en Fan, SW Modic -veranderinge: moontlike oorsake en bydrae tot die degenerasie van die lumbale skyf. Mediese hipoteses 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Interne skyfbreuk. Skyfprolapsprobleme oor 50 jaar. Spine (Phila PA 1976) 11, 650–653 (1986).
Postyd: Desember-13-2024