Dankie dat u Nature.com besoek het. Die blaaierweergawe wat u gebruik, het beperkte CSS-ondersteuning. Vir die beste resultate beveel ons aan dat u 'n nuwer blaaier gebruik (of dat u die versoenbaarheidsmodus in Internet Explorer deaktiveer). Intussen, om voortgesette ondersteuning te verseker, sal ons die webwerf sonder style en JavaScript vertoon.
Die vestiging van diermodelle van modiese verandering (MC) is 'n belangrike basis vir die bestudering van MC. Vier-en-vyftig Nieu-Seelandse wit konyne is verdeel in die skynoperasiegroep, spierinplantingsgroep (ME-groep) en nucleus pulposus-inplantingsgroep (NPE-groep). In die NPE-groep is die intervertebrale skyf blootgestel deur 'n anterolaterale lumbale chirurgiese benadering en 'n naald is gebruik om die L5-werwelliggaam naby die eindplaat te prik. NP is met 'n spuit uit die L1/2-intervertebrale skyf onttrek en daarin ingespuit. 'n Gat is in die subchondrale been geboor. Die chirurgiese prosedures en boormetodes in die spierinplantingsgroep en die skynoperasiegroep was dieselfde as dié in die NP-inplantingsgroep. In die ME-groep is 'n stukkie spier in die gat geplaas, terwyl niks in die skynoperasiegroep in die gat geplaas is nie. Na die operasie is MRI-skandering en molekulêr-biologiese toetse uitgevoer. Die sein in die NPE-groep het verander, maar daar was geen duidelike seinverandering in die skynoperasiegroep en die ME-groep nie. Histologiese waarneming het getoon dat abnormale weefselproliferasie by die inplantingsplek waargeneem is, en die uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ was verhoog in die NPE-groep. Inplanting van NP in die subchondrale been kan 'n diermodel van MC vorm.
Modiese veranderinge (MK) is letsels van die vertebrale eindplate en aangrensende beenmurg wat sigbaar is op magnetiese resonansiebeelding (MRI). Hulle is redelik algemeen by individue met geassosieerde simptome1. Baie studies het die belangrikheid van MK beklemtoon as gevolg van die assosiasie daarvan met lae rugpyn (LBP)2,3. de Roos et al.4 en Modic et al.5 het onafhanklik drie verskillende tipes subchondrale seinafwykings in die vertebrale beenmurg beskryf. Modiese tipe I veranderinge is hipoïntens op T1-geweegde (T1W) sekwensies en hiperintens op T2-geweegde (T2W) sekwensies. Hierdie letsel toon fissuur-eindplate en aangrensende vaskulêre granulasieweefsel in die beenmurg. Modiese tipe II veranderinge toon hoë sein op beide T1W- en T2W-sekwensies. In hierdie tipe letsel kan eindplaatvernietiging gevind word, sowel as histologiese vetterige vervanging van die aangrensende beenmurg. Modiese tipe III veranderinge toon lae sein in T1W- en T2W-sekwensies. Sklerotiese letsels wat ooreenstem met die eindplate is waargeneem6. MC word as 'n patologiese siekte van die ruggraat beskou en word nou geassosieer met baie degeneratiewe siektes van die ruggraat7,8,9.
In die lig van die beskikbare data, het verskeie studies gedetailleerde insigte verskaf in die etiologie en patologiese meganismes van MC. Albert et al. het voorgestel dat MC moontlik deur skyfherniasie veroorsaak kan word8. Hu et al. het MC toegeskryf aan ernstige skyfdegenerasie10. Kroc het die konsep van "interne skyfbreuk" voorgestel, wat beweer dat herhaalde skyftrauma tot mikroskeure in die eindplaat kan lei. Na spleetvorming kan eindplaatvernietiging deur die nucleus pulposus (NP) 'n outo-immuunrespons veroorsaak, wat verder lei tot die ontwikkeling van MC11. Ma et al. het 'n soortgelyke siening gedeel en berig dat NP-geïnduseerde outo-immuniteit 'n sleutelrol speel in die patogenese van MC12.
Immuunstelselselle, veral CD4+ T-helperlimfosiete, speel 'n kritieke rol in die patogenese van outo-immuniteit13. Die onlangs ontdekte Th17-subgroep produseer die pro-inflammatoriese sitoïen IL-17, bevorder chemokien-ekspressie en stimuleer T-selle in beskadigde organe om IFN-γ14 te produseer. Th2-selle speel ook 'n unieke rol in die patogenese van immuunresponse. Ekspressie van IL-4 as 'n verteenwoordigende Th2-sel kan lei tot ernstige immunopatologiese gevolge15.
Alhoewel baie kliniese studies oor MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 uitgevoer is, is daar steeds 'n gebrek aan geskikte dier-eksperimentele modelle wat die MC-proses wat gereeld by mense voorkom, kan naboots en gebruik kan word om die etiologie of nuwe behandelings soos geteikende terapie te ondersoek. Tot op hede is slegs 'n paar diermodelle van MC gerapporteer om die onderliggende patologiese meganismes te bestudeer.
Gebaseer op die outo-immuunteorie wat deur Albert en Ma voorgestel is, het hierdie studie 'n eenvoudige en reproduceerbare konyn-MC-model gevestig deur NP naby die geboorde werwel-eindplaat te outotransplanteer. Ander doelwitte is om die histologiese eienskappe van die diermodelle waar te neem en die spesifieke meganismes van NP in die ontwikkeling van MC te evalueer. Vir hierdie doel gebruik ons tegnieke soos molekulêre biologie, MRI en histologiese studies om die progressie van MC te bestudeer.
Twee konyne het tydens die operasie weens bloeding gesterf, en vier konyne het tydens narkose tydens MRI gesterf. Die oorblywende 48 konyne het oorleef en geen gedrags- of neurologiese tekens na die operasie getoon nie.
MRI toon dat die seinintensiteit van die ingebedde weefsel in verskillende gate verskil. Die seinintensiteit van die L5-werwelliggaam in die NPE-groep het geleidelik verander na 12, 16 en 20 weke na invoeging (T1W-volgorde het lae sein getoon, en T2W-volgorde het gemengde sein plus lae sein getoon) (Fig. 1C), terwyl die MRI-voorkoms van die ander twee groepe ingebedde dele relatief stabiel gebly het gedurende dieselfde tydperk (Fig. 1A, B).
(A) Verteenwoordigende opeenvolgende MRI's van die konyn se lumbale ruggraat op 3 tydspunte. Geen seinafwykings is gevind in die beelde van die skynoperasiegroep nie. (B) Die seineienskappe van die werwelliggaam in die ME-groep is soortgelyk aan dié in die skynoperasiegroep, en geen beduidende seinverandering word oor tyd by die inbeddingsplek waargeneem nie. (C) In die NPE-groep is die lae sein duidelik sigbaar in die T1W-volgorde, en die gemengde sein en lae sein is duidelik sigbaar in die T2W-volgorde. Van die 12-week periode tot die 20-week periode neem die sporadiese hoë seine rondom die lae seine in die T2W-volgorde af.
Duidelike beenhiperplasie kan gesien word by die inplantingsplek van die werwelliggaam in die NPE-groep, en die beenhiperplasie vind vinniger plaas van 12 tot 20 weke (Fig. 2C) in vergelyking met die NPE-groep, geen beduidende verandering word waargeneem in die gemodelleerde werwelliggame nie; skyngroep en ME-groep (Fig. 2C) 2A,B).
(A) Die oppervlak van die werwelliggaam by die geïmplanteerde gedeelte is baie glad, die gat genees goed, en daar is geen hiperplasie in die werwelliggaam nie. (B) Die vorm van die geïmplanteerde plek in die ME-groep is soortgelyk aan dié in die skynoperasiegroep, en daar is geen duidelike verandering in die voorkoms van die geïmplanteerde plek oor tyd nie. (C) Beenhiperplasie het by die geïmplanteerde plek in die NPE-groep voorgekom. Die beenhiperplasie het vinnig toegeneem en selfs deur die intervertebrale skyf na die kontralaterale werwelliggaam gestrek.
Histologiese analise verskaf meer gedetailleerde inligting oor beenvorming. Figuur 3 toon die foto's van die postoperatiewe snitte wat met H&E gekleur is. In die skynoperasiegroep was die chondrosiete goed gerangskik en geen selproliferasie is waargeneem nie (Fig. 3A). Die situasie in die ME-groep was soortgelyk aan dié in die skynoperasiegroep (Fig. 3B). In die NPE-groep is 'n groot aantal chondrosiete en proliferasie van NP-agtige selle egter by die inplantingsplek waargeneem (Fig. 3C);
(A) Trabekulae kan naby die eindplaat gesien word, die chondrosiete is netjies gerangskik met 'n eenvormige selgrootte en -vorm en geen proliferasie (40 keer). (B) Die toestand van die inplantingsplek in die ME-groep is soortgelyk aan dié van die skyngroep. Trabekulae en chondrosiete kan gesien word, maar daar is geen duidelike proliferasie by die inplantingsplek nie (40 keer). (B) Daar kan gesien word dat chondrosiete en NP-agtige selle aansienlik prolifereer, en die vorm en grootte van die chondrosiete is oneweredig (40 keer).
Die uitdrukking van interleukien 4 (IL-4) mRNA, interleukien 17 (IL-17) mRNA, en interferon γ (IFN-γ) mRNA is waargeneem in beide die NPE- en ME-groepe. Toe die uitdrukkingsvlakke van teikengene vergelyk is, was die geenuitdrukkings van IL-4, IL-17 en IFN-γ beduidend verhoog in die NPE-groep in vergelyking met dié van die ME-groep en die skynoperasiegroep (Fig. 4) (P < 0.05). In vergelyking met die skynoperasiegroep het die uitdrukkingsvlakke van IL-4, IL-17 en IFN-γ in die ME-groep slegs effens toegeneem en nie statistiese verandering bereik nie (P > 0.05).
Die mRNA-ekspressie van IL-4, IL-17 en IFN-γ in die NPE-groep het 'n beduidend hoër tendens getoon as dié in die skynoperasiegroep en die ME-groep (P < 0.05).
In teenstelling hiermee het die ekspressievlakke in die ME-groep geen beduidende verskil getoon nie (P>0.05).
Western blot-analise is uitgevoer met behulp van kommersieel beskikbare teenliggaampies teen IL-4 en IL-17 om die veranderde mRNA-ekspressiepatroon te bevestig. Soos getoon in Figure 5A, B, was die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 in die NPE-groep beduidend verhoog (P < 0.05) in vergelyking met die ME-groep en die skynoperasiegroep. In vergelyking met die skynoperasiegroep het die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 in die ME-groep ook nie daarin geslaag om statisties beduidende veranderinge te bereik nie (P> 0.05).
(A) Die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 in die NPE-groep was beduidend hoër as dié in die ME-groep en placebo-groep (P < 0.05). (B) Western blot-histogram.
As gevolg van die beperkte aantal menslike monsters wat tydens chirurgie verkry is, is duidelike en gedetailleerde studies oor die patogenese van MC ietwat moeilik. Ons het probeer om 'n diermodel van MC te vestig om die potensiële patologiese meganismes daarvan te bestudeer. Terselfdertyd is radiologiese evaluering, histologiese evaluering en molekulêr-biologiese evaluering gebruik om die verloop van MC wat deur NP-outograft geïnduseer is, te volg. Gevolglik het die NP-inplantingsmodel 'n geleidelike verandering in seinintensiteit van 12-week tot 20-week tydpunte tot gevolg gehad (gemengde lae sein in T1W-reekse en lae sein in T2W-reekse), wat weefselveranderinge aandui, en die histologiese en molekulêr-biologiese evaluasies het die resultate van die radiologiese studie bevestig.
Die resultate van hierdie eksperiment toon dat visuele en histologiese veranderinge plaasgevind het by die plek van werwelliggaam-oortreding in die NPE-groep. Terselfdertyd is die uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ gene, sowel as IL-4, IL-17 en IFN-γ waargeneem, wat aandui dat die oortreding van outoloë kern pulposus weefsel in die werwelliggaam 'n reeks sein- en morfologiese veranderinge kan veroorsaak. Dit is maklik om te vind dat die sein eienskappe van die werwelliggame van die diermodel (lae sein in die T1W volgorde, gemengde sein en lae sein in die T2W volgorde) baie soortgelyk is aan dié van menslike werwelselle, en die MRI eienskappe bevestig ook die waarnemings van histologie en bruto anatomie, dit wil sê, die veranderinge in die werwelliggaam selle is progressief. Alhoewel die inflammatoriese reaksie wat deur akute trauma veroorsaak word, kort na punksie kan verskyn, het MRI resultate getoon dat progressief toenemende sein veranderinge 12 weke na punksie verskyn het en tot 20 weke voortgeduur het sonder enige tekens van herstel of omkering van MRI veranderinge. Hierdie resultate dui daarop dat outologiese vertebrale NP 'n betroubare metode is om progressiewe MV in konyne te vestig.
Hierdie punksiemodel vereis voldoende vaardigheid, tyd en chirurgiese moeite. In voorlopige eksperimente kan disseksie of oormatige stimulasie van die paravertebrale ligamentstrukture lei tot die vorming van vertebrale osteofiete. Sorg moet gedra word om nie die aangrensende skyfies te beskadig of te irriteer nie. Aangesien die diepte van penetrasie beheer moet word om konsekwente en herhaalbare resultate te verkry, het ons handmatig 'n prop gemaak deur die skede van 'n 3 mm lange naald af te sny. Die gebruik van hierdie prop verseker 'n eenvormige boordiepte in die werwelliggaam. In voorlopige eksperimente het drie ortopediese chirurge wat by die operasie betrokke was, gevind dat 16-gauge naalde makliker is om mee te werk as 18-gauge naalde of ander metodes. Om oormatige bloeding tydens boorwerk te vermy, sal die naald vir 'n rukkie stilhou 'n meer geskikte invoeggat bied, wat daarop dui dat 'n sekere mate van MC op hierdie manier beheer kan word.
Alhoewel baie studies MC geteiken het, is min bekend oor die etiologie en patogenese van MC25,26,27. Gebaseer op ons vorige studies, het ons gevind dat outo-immuniteit 'n sleutelrol speel in die voorkoms en ontwikkeling van MC12. Hierdie studie het die kwantitatiewe uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ ondersoek, wat die hoofdifferensiasiepaaie van CD4+ selle na antigeenstimulasie is. In ons studie, in vergelyking met die negatiewe groep, het die NPE-groep hoër uitdrukking van IL-4, IL-17 en IFN-γ gehad, en die proteïenvlakke van IL-4 en IL-17 was ook hoër.
Klinies is IL-17 mRNA-uitdrukking verhoog in NP-selle van pasiënte met skyfherniasie28. Verhoogde IL-4- en IFN-γ-uitdrukkingsvlakke is ook gevind in 'n akute nie-kompressiewe skyfherniasiemodel in vergelyking met gesonde kontroles29. IL-17 speel 'n sleutelrol in inflammasie, weefselbesering in outo-immuun siektes30 en verbeter die immuunrespons op IFN-γ31. Verhoogde IL-17-gemedieerde weefselbesering is gerapporteer in MRL/lpr-muise32 en outo-immuniteit-vatbare muise33. IL-4 kan die uitdrukking van pro-inflammatoriese sitokiene (soos IL-1β en TNFα) en makrofaagaktivering34 inhibeer. Daar is berig dat die mRNA-uitdrukking van IL-4 verskil het in die NPE-groep in vergelyking met IL-17 en IFN-γ op dieselfde tydstip; Die mRNA-uitdrukking van IFN-γ in die NPE-groep was aansienlik hoër as dié in die ander groepe. Daarom kan IFN-γ-produksie 'n mediator wees van die inflammatoriese reaksie wat deur NP-interkalasie veroorsaak word. Studies het getoon dat IFN-γ deur verskeie seltipes geproduseer word, insluitend geaktiveerde tipe 1-helper-T-selle, natuurlike moordselle en makrofage35,36, en 'n belangrike pro-inflammatoriese sitokien is wat immuunresponse37 bevorder.
Hierdie studie dui daarop dat outo-immuunrespons betrokke kan wees by die voorkoms en ontwikkeling van MC. Luoma et al. het bevind dat die seinkenmerke van MC en prominente NP soortgelyk is op MRI, en beide toon 'n hoë sein in T2W-volgorde38. Sommige sitokiene is bevestig as nou geassosieer met die voorkoms van MC, soos IL-139. Ma et al. het voorgestel dat die opwaartse of afwaartse uitsteeksel van NP 'n groot invloed op die voorkoms en ontwikkeling van MC12 kan hê. Bobechko40 en Herzbein et al.41 het berig dat NP 'n immunotolerante weefsel is wat nie van geboorte af die vaskulêre sirkulasie kan binnedring nie. NP-uitsteeksels bring vreemde liggame in die bloedtoevoer in, waardeur plaaslike outo-immuunreaksies42 bemiddel word. Outo-immuunreaksies kan 'n groot aantal immuunfaktore veroorsaak, en wanneer hierdie faktore voortdurend aan weefsels blootgestel word, kan hulle veranderinge in seintransduksie43 veroorsaak. In hierdie studie is oorekspressie van IL-4, IL-17 en IFN-γ tipiese immuunfaktore, wat die noue verband tussen NP en MC's44 verder bewys. Hierdie diermodel boots die NP-deurbraak en toetrede tot die eindplaat goed na. Hierdie proses het verder die impak van outo-immuniteit op MC aan die lig gebring.
Soos verwag, bied hierdie diermodel ons 'n moontlike platform om MC te bestudeer. Hierdie model het egter steeds 'n paar beperkings: eerstens, tydens die dierwaarnemingsfase, moet sommige intermediêre stadium konyne geëuthanaseer word vir histologiese en molekulêre biologiese toetse, so sommige diere "raak mettertyd buite gebruik". Tweedens, hoewel drie tydpunte in hierdie studie gestel is, het ons ongelukkig slegs een tipe MC (Modic tipe I-verandering) gemodelleer, dus is dit nie genoeg om die menslike siekte-ontwikkelingsproses voor te stel nie, en meer tydpunte moet gestel word om al die seinveranderinge beter waar te neem. Derdens kan die veranderinge in weefselstruktuur inderdaad duidelik deur histologiese kleuring getoon word, maar sommige gespesialiseerde tegnieke kan die mikrostrukturele veranderinge in hierdie model beter openbaar. Byvoorbeeld, gepolariseerde ligmikroskopie is gebruik om die vorming van fibrokraakbeen in konyn-intervertebrale skywe te analiseer45. Die langtermyn-effekte van NP op MC en eindplaat vereis verdere studie.
Vier-en-vyftig manlike Nieu-Seelandse wit konyne (gewig ongeveer 2.5-3 kg, ouderdom 3-3.5 maande) is ewekansig verdeel in 'n skynoperasiegroep, spierinplantingsgroep (ME-groep) en senuweewortelinplantingsgroep (NPE-groep). Alle eksperimentele prosedures is goedgekeur deur die Etiekkomitee van Tianjin-hospitaal, en die eksperimentele metodes is uitgevoer in streng ooreenstemming met die goedgekeurde riglyne.
Sekere verbeterings is aangebring aan die chirurgiese tegniek van S. Sobajima 46. Elke konyn is in 'n laterale lêposisie geplaas en die anterior oppervlak van vyf opeenvolgende lumbale intervertebrale skywe (IVD's) is blootgestel met behulp van 'n posterolaterale retroperitoneale benadering. Elke konyn is algemene narkose gegee (20% uretaan, 5 ml/kg via die ooraar). 'n Longitudinale velinsnyding is gemaak vanaf die onderste rand van die ribbes tot die bekkenrand, 2 cm ventraal tot die paravertebrale spiere. Die regter anterolaterale ruggraat van L1 tot L6 is blootgestel deur skerp en stomp disseksie van die oorliggende subkutane weefsel, retroperitoneale weefsel en spiere (Fig. 6A). Die skyfvlak is bepaal deur die bekkenrand as 'n anatomiese landmerk vir die L5-L6 skyfvlak te gebruik. Gebruik 'n 16-gauge punksienaald om 'n gat naby die eindplaat van die L5-werwel tot 'n diepte van 3 mm te boor (Fig. 6B). Gebruik 'n 5 ml-spuit om die outologiese nucleus pulposus in die L1-L2 intervertebrale skyf te aspireer (Fig. 6C). Verwyder die nucleus pulposus of spier volgens die vereistes van elke groep. Nadat die boorgat verdiep is, word absorbeerbare hegtings op die diep fascia, oppervlakkige fascia en vel geplaas, met sorg dat die periosteale weefsel van die werwelliggaam nie tydens die operasie beskadig word nie.
(A) Die L5–L6-skyf word blootgestel via 'n posterolaterale retroperitoneale benadering. (B) Gebruik 'n 16-gauge naald om 'n gat naby die L5-eindplaat te boor. (C) Outologiese MF's word geoes.
Algemene narkose is toegedien met 20% uretaan (5 ml/kg) wat via die ooraar toegedien is, en lumbale ruggraat-radiografieë is herhaal op 12, 16 en 20 weke postoperatief.
Konyne is geoffer deur intramuskulêre inspuiting van ketamien (25.0 mg/kg) en intraveneuse natriumpentobarbital (1.2 g/kg) op 12, 16 en 20 weke na die operasie. Die hele ruggraat is verwyder vir histologiese analise en werklike analise is uitgevoer. Kwantitatiewe omgekeerde transkripsie (RT-qPCR) en Western blotting is gebruik om veranderinge in immuunfaktore op te spoor.
MRI-ondersoeke is op konyne uitgevoer met behulp van 'n 3.0 T kliniese magneet (GE Medical Systems, Florence, SC) toegerus met 'n ortogonale ledemaatspoelontvanger. Konyne is verdoof met 20% uretaan (5 mL/kg) via die ooraar en toe op hul rug in die magneet geplaas met die lumbale streek gesentreer op 'n sirkelvormige oppervlakspoel met 'n deursnee van 5 duim (GE Medical Systems). Koronale T2-geweegde lokaliseerderbeelde (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) is verkry om die ligging van die lumbale skyf van L3-L4 tot L5-L6 te definieer. Sagittale vlak T2-geweegde snitte is verkry met die volgende instellings: vinnige spin-eggo-volgorde met 'n herhalingstyd (TR) van 2200 ms en 'n eggo-tyd (TE) van 70 ms, matriks; gesigsveld van 260 en agt stimuli; Die snydikte was 2 mm, die gaping was 0.2 mm.
Nadat die laaste foto geneem is en die laaste konyn doodgemaak is, is die skyn-, spier-ingebedde en NP-skyfies verwyder vir histologiese ondersoek. Weefsels is vir 1 week in 10% neutrale gebufferde formalien gefikseer, met etileendiamientetraasynsuur ontkalk en in paraffien gesny. Weefselblokke is in paraffien ingebed en met behulp van 'n mikrotoom in sagittale snitte (5 μm dik) gesny. Snite is gekleur met hematoksilien en eosine (H&E).
Nadat die intervertebrale skywe van die konyne in elke groep versamel is, is totale RNS geëkstraheer met behulp van 'n UNIQ-10-kolom (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) volgens die vervaardiger se instruksies en 'n ImProm II omgekeerde transkripsiestelsel (Promega Inc., Madison, WI, VSA). Omgekeerde transkripsie is uitgevoer.
RT-qPCR is uitgevoer met behulp van 'n Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., VSA) en SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VSA) volgens die vervaardiger se instruksies. Die PCR-reaksievolume was 20 μl en het 1.5 μl verdunde cDNA en 0.2 μM van elke primer bevat. Primers is ontwerp deur OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) en vervaardig deur Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Tabel 1). Die volgende termiese sikluskondisies is gebruik: aanvanklike polimerase-aktiveringstap by 94°C vir 2 min, dan 40 siklusse van 15 s elk by 94°C vir templaatdenaturasie, uitgloeiing vir 1 min by 60°C, verlenging en fluoresensie. Metings is vir 1 min by 72°C uitgevoer. Alle monsters is drie keer versterk en die gemiddelde waarde is gebruik vir RT-qPCR-analise. Amplifikasiedata is geanaliseer met behulp van FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, VSA). IL-4, IL-17, en IFN-γ geenekspressie is genormaliseer na die endogene kontrole (ACTB). Relatiewe ekspressievlakke van teiken mRNA is bereken met behulp van die 2-ΔΔCT-metode.
Totale proteïen is uit weefsels onttrek met behulp van 'n weefselhomogeniseerder in RIPA-lisebuffer (wat 'n protease- en fosfatase-inhibeerdermengsel bevat) en dan vir 20 minute by 4°C teen 13 000 rpm gesentrifugeer om weefselreste te verwyder. Vyftig mikrogram proteïen is per baan gelaai, geskei deur 10% SDS-PAGE, en dan na 'n PVDF-membraan oorgedra. Blokkering is vir 1 uur by kamertemperatuur in 5% vetvrye droë melk in Tris-gebufferde soutoplossing (TBS) wat 0,1% Tween 20 bevat, uitgevoer. Die membraan is oornag by 4°C met konyn-anti-dekorin primêre teenliggaam (verdun 1:200; Boster, Wuhan, China) (verdun 1:200; Bioss, Beijing, China) geïnkubeer en op die tweede dae gereageer; met sekondêre teenliggaam (bok-anti-konyn-immunoglobulien G teen 1:40 000 verdunning) gekombineer met peperwortelperoksidase (Boster, Wuhan, China) vir 1 uur by kamertemperatuur. Western blot-seine is opgespoor deur verhoogde chemiluminessensie op die chemiluminesserende membraan na X-straalbestraling. Vir densitometriese analise is blots geskandeer en gekwantifiseer met behulp van BandScan-sagteware en die resultate is uitgedruk as die verhouding van teikengeen-immunoreaktiwiteit tot tubulien-immunoreaktiwiteit.
Statistiese berekeninge is uitgevoer met behulp van die SPSS16.0 sagtewarepakket (SPSS, VSA). Data wat tydens die studie ingesamel is, is uitgedruk as gemiddelde ± standaardafwyking (gemiddelde ± SD) en geanaliseer met behulp van eenrigting-herhaalde-metings-variansie-analise (ANOVA) om verskille tussen die twee groepe te bepaal. P < 0.05 is as statisties beduidend beskou.
Dus, die vestiging van 'n diermodel van MC deur outologiese NP's in die werwelliggaam in te plant en makroanatomiese waarneming, MRI-analise, histologiese evaluering en molekulêr-biologiese analise uit te voer, kan 'n belangrike instrument word vir die assessering en begrip van die meganismes van menslike MC en die ontwikkeling van nuwe terapeutiese intervensies.
Hoe om hierdie artikel aan te haal: Han, C. et al. 'n Diermodel van Modic-veranderinge is gevestig deur outologiese nucleus pulposus in die subchondrale been van die lumbale ruggraat in te plant. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., en Boos, N. Magnetiese resonansiebeelding van die lumbale ruggraat: voorkoms van skyfherniasie en -retensie, senuweewortelkompressie, eindplaatafwykings en fasetgewrig-osteoartritis in asimptomatiese vrywilligers. koers. Radiologie 209, 661–666, doi:10.1148/radiologie.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, en Leboeuf-Eed, K. Modic-veranderinge en hul verband met kliniese bevindinge. European Spine Journal: amptelike publikasie van die European Spine Society, die European Society of Spinal Deformity, en die European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Modiese veranderinge in die lumbale werwel-eindplate: voorkoms en assosiasie met lae rugpyn en isias in middeljarige manlike werkers. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., en Dalinka, M. MRI van beenmurgveranderinge naby die eindplaat in degeneratiewe siekte van die lumbale ruggraat. AJR. Amerikaanse Tydskrif vir Radiologie 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, en Carter, JR Degeneratiewe skyfsiekte: evaluering van vertebrale murgveranderinge met MRI. Radiologie 166, 193–199, doi:10.1148/radiologie.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, en Carter, JR Beeldvorming van degeneratiewe skyfsiekte. Radiologie 168, 177–186, doi: 10.1148/radiologie.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Voorspellers van neovertebrale eindplaat (Modic) dui op veranderinge in die algemene bevolking. European Spine Journal: Amptelike Publikasie van die European Spine Society, die European Society of Spinal Deformity, en die European Society for Servical Spine Research, Afdeling 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB en Mannisch, K. Modic-veranderinge na lumbale skyfherniasie. European Spine Journal: Amptelike Publikasie van die European Spine Society, die European Society of Spinal Deformity en die European Society for Servical Spine Research 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., en Kaapa, E. Modiese tipe I veranderinge kan vinnig progressiewe deformasionele skyfdegenerasie voorspel: 'n 1-jaar prospektiewe studie. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ en Fan, SW Modiese veranderinge: moontlike oorsake en bydrae tot lumbale skyfdegenerasie. Mediese Hipoteses 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Interne skyfbreuk. Skyfprolapsprobleme oor 50 jaar. Ruggraat (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Plasingstyd: 13 Desember 2024